培養基pH值變化迅速

1.培養箱CO2分壓設置錯誤  根據培養基中NaHCO3的濃度增大或降低培養箱CO2的分壓，NaHCO3濃度為2.0-3.7g/L時，應相應地使用5%-10%的CO2分壓

2.細胞培養瓶瓶蓋過緊  將瓶蓋旋松1/4圈

3.碳酸氫鹽緩存系統緩沖能力不足   加入HEPES緩沖液，使其終濃度為10-25mM

4.培養基中鹽含量不正確  CO2平衡環境中使用以Earle平衡鹽為基礎的培養基，大氣條件下使用以Hanks平衡鹽為基礎的培養基

5.細菌、酵母或真菌污染   將細胞和培養基滅菌處理后丟棄

 

細胞無法在培養器皿上貼壁生長

 

1.細胞消化過度  縮短消化時間或減少用量

2.支原體污染  隔離細胞，檢測是否感染支原體；清洗通風廚和培養箱，如細胞被污染，滅菌處理后丟棄

3.培養基中無附著因子  如果使用的是無血清配方，應確保含有附著因子或者使用經過包被的培養板

 

懸浮細胞聚集成團

 

1.存在鈣離子和鎂離子  用不含鈣離子和鎂離子的平衡鹽溶液清洗細胞，輕輕吹打細胞，使其形成單細胞懸液

2.支原體污染  隔離細胞，檢測是否感染支原體；清洗通風廚和培養箱，如細胞被污染，滅菌處理后丟棄

3.蛋白水解酶消化過度導致細胞裂解、DNA釋放  用0.001%DNA酶I處理細胞；用PBS沖洗后再接種到新培養基中

 

細胞生長緩慢

 

1.培養基或血清改變  比較不同培養基配方中葡萄糖、氨基酸及其他成分有無差異；通過生長實驗比較新老批次血清有無差異；增大細胞初始接種密度；使細胞逐步適應新的培養基

2.必需生長促進成分（如L-或生長因子）耗竭、缺乏或分解  去除原培養基，加入新鮮培養基；向培養基中添加生長促進成分（如L-）

3.輕度細菌或真菌污染  在不添加抗生素的條件下進行培養，如細胞被污染，滅菌處理后丟棄

4.時間存儲不當  血清應于-5℃至-20℃下儲存；培養基應于2℃~8℃下避光儲存；盡量減少血清和培養基見光時間

5.細胞初始接種密度低  增大活細胞接種密度

6.細胞衰老、老化  將老化細胞丟棄，取用代數較少的細胞

7.支原體污染  隔離細胞，檢測是否感染支原體；清洗通風廚和培養箱，如細胞被污染，滅菌處理后丟棄

 

細胞死亡

 

1.培養箱中無CO2  監測培養箱中CO2使用速度以便確定及時更換氣瓶；經常檢測管路連接處是否漏氣；不要頻繁開啟培養箱門

2.培養箱內溫度有波動  監測培養箱內溫度，及時校正

3.使用抗生素達到毒性濃度  減少抗生素的用量；使用無血清培養基時，抗生素濃度應降低至1/10

4.細胞復蘇或凍存時受到損傷  取用新的細胞

5.培養基的滲透壓不合適  檢查*培養基的滲透壓。大多數哺乳動物細胞可耐受260~350mOsm/kg的滲透壓，加入某些試劑和藥物后會影響培養基的滲透壓；昆蟲細胞培養基的滲透壓（340~380mOsm/kg）要高于哺乳動物細胞

6.培養基中毒性代謝產物蓄積  去除原培養基，換用新鮮培養基

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